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月光花豆乙醇提取物的镇痛作用及其机制研究
作者:唐秀能,黄仁彬,黄媛恒,黄纯真,王乃平    
作者单位:1.广西医科大学,广西 南宁 530021; 2.广西中医学院附属瑞康医院,广西 南宁 530011

《时珍国医国药》 2009年 第12期

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       【摘要】 
       目的考察月光花豆乙醇提取物的镇痛作用并初步探讨其作用机制。方法采用醋酸致小鼠扭体法,小鼠热板法及小鼠温浴法,观察月光花豆乙醇提取物的镇痛作用,同时检测热板法小鼠的血清和脑组织PGE2、MDA的含量及SOD活性。结果月光花豆乙醇提取物能显著减少小鼠的扭体次数,显著延长小鼠热板反应舔足潜伏期及温浴致小鼠缩尾反应潜伏期,同时能使热板法小鼠血清和脑组织PGE2,MDA含量明显降低,SOD活性明显增强。结论月光花豆乙醇提取物具有显著的镇痛作用,其作用机制可能与减少PGE2和MDA含量、提高SOD活性有关。
       【关键词】  月光花豆乙醇提取物; 镇痛; 机制; 前列腺素E2
       Study on the Analgesic Effects and its Mechanisms of Ethanol Extract of Calonyction acculeatum Beans
       TANG Xiuneng, HUANG Renbin, HUANG Yuanheng, HUANG Chunzhen, WANG Naiping
       1.Department of Pharmacology, Guangxi Medical University, Nanning, Guangxi 530021,China; 2.The Affiliated Ruikang Hospital, Traditional Chinese Medical University, Nanning, Guangxi 530011 China
       Abstract:ObjectiveTo investigate the analgesic effects of ethanol extract of Calonyction acculeatum Beans and its primary analgesic mechanisms. MethodsMouse twisting numbers induced by acetic acid, mouse pain threshold after heat stimulation on hot-plate and in hot-water tests were observed to investigate the analgesic effects, meanwhile, the contents of prostaglandin E (PGE2) and malondialdehyde (MAD) and the activity of superoxide dismutase(SOD) in mice serum and cerebrum were measured to explore primary analgesic mechanisms of calonyction aculeatum beans.ResultsThe ethanol extracts of Calonyction aculeatum Beans could remarkably reduce mouse twisting numbers and prolong pain thresholds, meanwhile, it also reduced the elevated MDA and PGE2 productions and enhanced SOD level in mice serum and cerebrum . ConclusionThe ethanol extracts of Calonyction acculeatum Beans has significant analgesic effects, which may be related to reducing the elevated MDA, PGE2 production and enhancing SOD level.
       Key words:Calonyction acculeatum;   Analgesia;   Analgesic mechanism;   Prostaglandin E2
       
       月光花Calonyction aculeatum属于旋花科(Convolvulaceae)植物,原产热带美洲,现广泛分布于全热带地区。在国内主要分布于广东、广西、云南等地,属一年生缠绕草本植物。月光花豆是月光花的蒴果,有舒筋活络、消肿止痛、活血化淤之功效,在广西民间用于腰腿痛、风湿痛、月经痛、软组织损伤等方面的治疗,有较好疗效。笔者未见国内外资料中对其有这方面药理研究的详细报道。本实验对月光花豆乙醇提取物的镇痛作用进行研究,为进一步开发利用月光花豆并把其开发成为新药提供理论及实验依据。
       1   材料与方法
       1.1   动物
       昆明种小鼠,体质量(20±2)g,SPF级,广西医科大学医学实验动物中心提供。实验动物生产许可证:SCXKG桂2003-0003,实验动物使用许可证:SYXK桂2003-0005。
       1.2  药物及试剂 
       月光花豆醇提物,广西医科大学药理教研室提供。冰醋酸,成都市科龙化工试剂厂产品,批号:20070101;阿司匹林,舒泰神(北京)药业有限公司产品,批号070309;盐酸吗啡(Mor ),沈阳第一制药厂产品,批号:002747;伊文斯蓝,中国医药上海化学试剂公司产品,批号:F20030714。GJ-8402型热板测痛仪,浙江宁海白石电子医药仪器厂产品。甲醇,成都市科龙化工试剂厂产品,AR;氢氧化钾,天津化学试剂三厂产品,AR;盐酸,广东省廉江市爱廉化试剂有限公司产品;SOD试剂盒、MDA试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。
       2  方法
       2.1 对醋酸诱发小鼠扭体反应的影响[1] 
       取实验用小鼠50只,(20±2)g,雌雄各半,随机分为空白对照组,阳性阿司匹林组,月光花乙醇提取物高、中、低剂量组,每组10只,连续灌胃给药7 d,末次给药后1 h,各小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 ml/只,记录自注射醋酸后15 min内各组小鼠的扭体反应次数(小鼠伸展后肢,腹部内凹和臀部抬高),并计算药物对小鼠扭体反应的抑制率。
       2.2  对热板法实验的影响[1] 
       将雌性小鼠置于恒温水浴箱的自制热板上(55℃),以小鼠舔后足潜伏期为痛阈值指标。实验前筛选痛阈5~30 s者为合格鼠,给药前测痛2次,间隔10 min,取其平均值作为基础痛阈。将测痛后的小鼠随机分为5组:空白对照组,阳性对照组(Mor 4mg·kg-1于实验前30 min ip 一次给药)、 月光花提取物高、中、低剂量组。连续灌胃给药7 d,1次/d,末次给药后30,60,90,120 min各重复测定舔足潜伏期,疼痛反应截止期为60 s。实验结束后,快速摘小鼠眼球取血,3 500 r/min离心15 min,弃下层沉淀,留上清液。同时取小鼠前脑组织称重,加入适量的NS制成10%的脑组织匀浆液,离心,留上清液。将血清和脑组织匀浆液置-20℃中保存分别待测PGE2、MDA的含量和SOD活性。
       2.3  对小鼠温浴法实验的影响[1]   
       将小鼠尾尖渗入48℃恒温水浴中3 cm,记录缩尾反应潜伏期作痛阈指标。其他方法同“2.2”项。末次给药后60 min各重复测定舔足潜伏期,疼痛反应截止期为60 s。
       2.4  PGE2和MDA的含量以及SOD活性的测定 
       MDA含量和SOD活性的测定分别按照试剂盒说明书的方法进行操作。小鼠血清和脑组织PGE2含量的测定:分别取离心后血清和脑组织上清200 μl,加0.5 mol·L-1 KOH-甲醇溶液1 ml,50℃水浴异构化20 min后,用甲醇稀释至4 ml,于紫外分光光度计波长278 nm处测定其吸光度(OD)值,代表PGE2的生成量[2]   。
       2.5  统计学处理 
       实验所得的数据均以±s表示,使用SPSS13.0统计学软件进行方差分析,并作组间比较。
       3  结 果
       3.1  各组小鼠对醋酸致痛的影响比较
       结果见表1。表1  月光花豆乙醇提取物对醋酸诱发小鼠扭体反应的影响(略)
       3.2  热板法对各组小鼠给药后痛阈值的影响比较
       结果见表2。表2  月光花豆乙醇提取物对小鼠热板法反应的影响(略)
       3.3  温浴法对各组小鼠给药后痛阈值的影响比较
       结果见表3。表3  月光花豆乙醇提取物对小鼠温浴法反应的影响(略)
       3.4  热板法中各组小鼠给药后血清PGE2、MDA含量及SOD活性的影响比较
       结果见表4。表4  对热板法小鼠血清PGE2,MDA含量及SOD活性的影响(略)
       3.5  热板法中各组小鼠给药后脑组织PGE2、MDA含量及SOD活性的影响比较
       结果见表5。表5  对热板法小鼠脑组织PGE2,MDA含量及SOD活性的影响(略)
       4  讨论
        小鼠热板法和扭体法镇痛实验结果表明,月光花豆乙醇提取物对物理性、化学性致痛因子所致疼痛都有明显的镇痛作用,镇痛作用随给药剂量呈一定的正相关。
        研究表明,大量PGE2和白三烯等与氧自由基是产生疼痛症状的主要原因[3]。PGE2是一种非常重要的疼痛介质之一,PGE2的外周致痛作用早已明确,近年对PGE2的研究主要涉及其中枢机制。Malinberg等利用鞘内透析法证实福尔马林双相反应与透析液中PGE2含量呈正相关,鞘内注射消炎痛可以抑制大鼠福尔马林Ⅱ相反应,这些研究均提示PGE2参与中枢疼痛的调控[4]。本研究表明月光花豆乙醇提取物可降低脑组织及血清中PGE2含量,提示的镇痛作用与抑制PGE2合成也有一定的关系。
        王洁等报道,氧自由基在外周和中枢均有致痛作用,自由基清除剂维生素E和SOD则可对抗此致痛作用。从实验中观察到,空白组实验小鼠血清和脑组织中SOD活性降低,MDA含量升高,而月光花豆乙醇提取物使SOD活力和MDA含量异常改变得以恢复,提示的镇痛作用可能与清除自由基有关[5]。
        综上所述,月光花豆乙醇提取物对小鼠的镇痛作用可能与抑制PGE2合成有关、降低MDA含量和提高SOD活性有关,作用部位与外周和中枢可能都有关系。
       【参考文献】
           [1]徐叔云, 卞如濂, 陈 修. 药理实验方法学[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2003:882.
       
       [2]陈奇.中药药理研究方法[M]. 北京: 人民卫生出版社, 1993:370.
       
       [3]Grisham MS,Granger DN,Lefer BJ·Modulation of leukocyte-endothelial interaclions by teactive metabolites of oxygen and nitrogen relevance to ischemic heart disease[J]. Free Radic Biol, 1998, 25: 404.
       
       [4]王洁, 宋必卫, 马传庚, 等. 氧自由基与疼痛[J].中国药理学通报, 1998,14(2):107.
       
       [5]张黎, 赵春晖, 陈志武, 等. 银杏叶总黄酮镇痛作用及机制的探讨[J]. 安徽医科大学学报, 2001, 36(4): 263.

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