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痔瘘熏洗颗粒对肛门溃疡的作用研究
作者:黄坚, 郭秋平, 周婉, 钱鹏, 金若敏

《时珍国医国药》 2006年 第6期

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       【关键词】  痔瘘熏洗颗粒;,,,肛门溃疡;,,,抗炎;,,,镇痛;,,,抗菌
        摘要:目的观察痔瘘熏洗颗粒对动物实验性肛门溃疡愈合与抗炎、镇痛、抗菌的作用。方法在大鼠肛门外周粘膜注射冰醋酸制备大鼠肛门溃疡模型,采用小鼠耳肿胀、热板法和扭体法,外用给药观察药物促溃疡愈合、抗炎、镇痛作用,采用试管稀释法观察该药的体外抗菌作用。结果痔瘘熏洗颗粒外用能明显缩小大鼠肛门溃疡面积和缩短肛门溃疡平均愈合天数,此外还具有对抗二甲苯致小鼠耳肿胀、提高小鼠热痛阈值、减少冰醋酸致小鼠的扭体数及体外抗金黄色葡萄球菌的作用。结论痔瘘熏洗颗粒具有促进大鼠肛门溃疡愈合、抗炎、镇痛和抗菌作用。
       关键词:痔瘘熏洗颗粒;   肛门溃疡;   抗炎;   镇痛;   抗菌
       Study of Zhi-Lou-Xun-Xi Granule on Anal Ulceration
       HUANG Jian, GUO Qiu-ping,   ZHOU Wan,  QIAN Peng, JIN Ruo-min
       (The Pharmacology and Toxicity Research Center, Shanghai University of TCM, Shanghai 201203, China)
       Abstract:ObjectiveTo observe the effects of Zhi-Lou-Xun-Xi(ZLXX)granule on experimental anal ulceration,inflammation and soreness in animals.MethodsThe model of the anal ulceration was established in rat by xylene.The hot plate test and writhing test were used to examine the effects on ulceration;inflammation and soreness.Tube culture was used to study the anti-bacteria effect in virto.ResultsZLXX granule by external use could reduce the wound area at the anus and promote the anal ulceration healing.In addition,ZLXX granules decreased the ear edeam induced by xylene,elevated the pain threshold with the hot plate method,reduced mouse body twisting times and inhibited the growth of staphylococcusaureus.ConclusionZLXX granules can significantly improve healing of experimental anal ulceration in rat,and has obvious anti-inflammation;analgesia and anti-bacteria effects.
       Key words:Zhi-Lou-Xun-Xi Granules;  Anal ulceration;  Anti-inflammation;  Anglgesia;  Antibacteria
   
  痔瘘熏洗颗粒有清热解毒、活血化瘀等作用。临床上用于治疗痔及瘘术后局部不适症状,加速伤口愈合和痔核消退。为验证其药效作用,本实验对该药进行了主要药效学研究。报告如下。
        1  材料
       1.1  药物及试剂痔瘘熏洗颗粒(4 g生药/g):由上海中医大学药业股份有限公司提供,批号031001;痔瘘熏洗颗粒干膏粉(简称痔瘘熏洗粉)(8 g生药/g):由上海中医大学药业有限公司提供,批号031001;糊精:由上海中医大学药业股分有限公司提供;洁尔阴洗液:成都恩威制药有限公司产品,批号0211021;冰醋酸(分析纯):中国医药(集团)上海化学试剂公司产品,批号F20030124。
       1.2  动物Wistar大鼠,雌雄兼用,合格证号:SCXK(沪)2003-0003;昆明种小鼠,雌雄兼用,合格证号:SCXK(沪)2003-0003。均由上海斯莱克实验动物有限公司提供。
       1.3  菌株金黄色葡萄球菌ATCC6538株;大肠杆菌8099株;变形杆菌ATCC6538株;福氏痢疾杆菌ATCC6538株;肺炎杆菌临床分离株;伤寒沙门菌临床分离株;肠炎沙门菌临床分离株。
       1.4  统计分法除抗菌实验外,所有实验数据均以±s表示,用t 检验进行统计分析。
         2  方法和结果
       2.1  促大鼠肛门溃疡伤口愈合实验[1]取大鼠,雄性,体重150~180 g,在大鼠肛门外周粘膜上部注射75%冰醋酸0.05 ml/只,24 h后选取溃疡面在0.2~0.4 cm2的大鼠,均匀分为5组,使各组大鼠肛门平均溃疡面积相近,给药组大鼠肛门溃疡部涂抹不同浓度熏洗颗粒受试药液和10%洁尔阴,赋形剂对照组给予等量赋形剂溶液,每次0.4 ml/只,2次/d,间隔4 h,直至溃疡面愈合。每日观察大鼠肛门溃疡愈合情况并于给药后第4,8,12天用圆规测量大鼠肛门溃疡长、宽并计算面积。最后以伤口平复、无炎性渗出为痊愈标准。结果显示1次注射冰醋酸,大鼠肛门部出现0.2~0.4 cm2的一个白色溃疡面,随后赋形剂对照组大鼠肛门溃疡伤口会自行逐渐愈合,痔瘘熏洗颗粒组大鼠溃疡伤口愈合速度明显加快,给药第8天起熏中、大剂量组大鼠肛门溃疡面积明显小于赋形剂对照组,肛门溃疡伤口平均愈合天数亦缩短,与赋形剂对照组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。洁尔阴组大鼠肛门溃疡愈合速度也较快,给药第8天起大鼠肛门溃疡面积明显缩小,且伤口平均愈合天数缩短,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结果见表1。表1  痔瘘熏洗颗粒对大鼠肛门溃疡的面积的影响(略)表2  痔瘘熏洗颗粒对大鼠肛门溃疡愈合时间的影响(略)
       2.2  抗二甲苯致小鼠耳肿胀实验[2]取雄性小鼠,18~22 g,随机分为5组,即空白组,熏小、中、大剂量组,洁尔阴组,每组10只。熏小、中、大剂量组在小鼠双侧耳廓分别涂沫1.5%,6%,24%的痔瘘熏洗颗粒溶液,洁尔阴组涂抹10%洁尔阴溶液,赋形剂对照组涂以等量0.75%糊精溶液,每只耳50 μl/次,间隔20 min/次,连续3次。末次涂药后20 min,各鼠右耳涂二甲苯50μl,30 min后脱颈椎外死小鼠,用打孔器(直径7 mm)打下左右耳片,称重,计算肿胀度和肿胀抑制率。
       肿胀度(mg)=右耳片重量(mg)-左耳片重量(mg)
       肿胀抑制率(%)=赋形剂对照组耳肿胀度-给药组耳肿胀度     赋形剂对照组耳肿胀度×100%
       结果显示熏中、大剂量组小鼠的耳肿胀度明显减轻,与赋形剂对照组比有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。肿胀抑制率分别33.1%和52.9%。洁尔阴组小鼠的耳肿胀度减轻,与赋形剂对照组比较,有显著性差异(P<0.05)。结果见表3。表3  痔瘘熏洗颗粒对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(略)
       2.3  镇痛实验
       2.3.1  小鼠热板实验[2]取雌性小鼠,18~22 g,在室温20℃环境下,调节恒温水浴水温度至(55±0.5)℃,金属盘的底部接触水面。然后将小鼠放在热板上,用秒表记录从小鼠投入热板至出现舔后足的反应时间(潜伏期)作为该小鼠的痛阈值。给药前测定小鼠的痛阈值(共测两次,以平均值为5~30 s者为合格)。将筛选合格小鼠分为5组(即空白组,熏、中大剂量组和洁尔阴组)每组10只。将小鼠放入塑料盒中(35 cm×30 cm)用40℃左右的相应药液浸泡,液面高0.5 cm,浸泡20 min,赋形剂对照组用等量赋形剂溶液同法浸泡,浸泡后10,100 min分别测定小鼠痛阈值。如阈值超过60 s,即停止测试而按60 s计。按下列分式计算痛阈提高百分率。并分别对各组给药前后、各组间痛阈值进行比较。
       痛阈提高率(%)=药组平均舔后足时间-赋形剂对照组平均舔后足时间     赋形剂对照组平均舔足时间×100%
       结果显示,给予赋形剂后小鼠舔后足时间明显延长,此认为是小鼠经过40℃药液浸泡后对热刺激反应性降低所造成的,痔瘘熏洗颗粒各剂量组小鼠舔后足时间也明显延长,与赋形剂组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。10 min和100 min的最大痛阈提高百分率分别为93.4%,65.9%。洁尔阴组小鼠舔后足时间亦延长,10 min时最高痛阈提高率为107.4%,但作用时间较短,见表4。
表4  痔瘘熏洗颗粒对热板致小鼠痛阈值的影响(略)
       2.3.2  取小鼠50只,雌雄各半,18~22 g,随机分为5组,即空白组,熏小、中、大剂量组和洁尔阴组,每组10只。给药前24 h将小鼠腹部脱毛,然后放入鼠盒中(35 cm×30 cm),用40℃左右的相应药液浸泡,液面高1 cm,浸泡20 min,赋形剂对照组用等量赋形剂溶液同法浸泡,浸泡后10 min,小鼠腹腔注射0.9%冰醋酸溶液0.2 ml/只,观察20 min内各组小鼠的扭体次数。
痛阈提高率(%)= 赋形剂对照组平均扭体次数-给药组平均扭体次数     赋形剂对照组扭体次数×100%
       结果显示,给予冰醋酸后,各组小鼠均出现不同程度的扭体反应,但熏中、大剂量组小鼠的扭体次数明显减少,与赋形剂对照组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。洁尔阴组小鼠的扭体次数明显减少,与赋形剂对照组比较,有显著性差异(P<0.01)。结果见表5。表5  痔瘘熏洗颗粒对小鼠醋酸扭体反应的抑制作用(略)
       2.4  体外抗菌实验[3]采用试管稀释测定痔瘘熏洗粉对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌、福氏痢疾杆菌、肺炎杆菌、伤寒沙门菌、肠炎沙门菌的敏感性。称取痔瘘洗粉12 g,用生理盐水溶解并稀释至100 ml,样品配制后经0.22 μm孔每径滤器除菌。在第1管加入0.5 ml药物液,依次对倍稀释至第8管,另设9号为庆大霉素对照试管,将上述细菌的稀释液1.5 ml加入1~9号试管中。培养48 h,用比浊法观察该药有无抑菌作用。结果显示痔瘘熏洗粉溶液对金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用,最低抑菌浓度(MIC)为1.88 mg/ml相当于临床人用浓度的12.5%。
         3  讨论
       痔瘘熏洗颗粒是用于痔及瘘术后的外治洗剂。《理瀹骈文》认为:外治之法即内治之理,药性归经,疗效标本同源,尤捷于内治也。中医辨证,痔疮多以热、瘀为主,故对痔疮治宜清热解毒、活血化瘀。痔瘘熏洗颗粒由虎杖、蒲公英、黄柏等中药组成。方中虎杖苦平,功用清热利湿,通络;蒲公英苦寒,功用清热解毒散结;黄柏苦寒,功用清热利湿,泄火解毒;苦参苦寒,功用清热燥湿、杀虫止痒。全方共奏清热解毒、活血化瘀之效。经长期临床观察,该药对痔疮发作和瘘术后的伤口愈合由较显著疗效。临床痔疮多以出血、肿痛、渗出等症状为主,这均是由于痔疮破损,发炎和感染所造成。在实验中我们发现,痔瘘熏洗颗粒对大鼠肛门溃疡面愈合有显著的促进作用,能对抗二甲苯致小鼠耳肿胀、提高小鼠热痛阈值、减少冰醋酸致小鼠的扭体数及体外抗金黄色葡萄球菌的作用。上述作用说明该药对痔疮有一定的治疗作用。
         参考文献
       [1]胡林山,郭宏杰,李云捧,等.愈痔膏的药理学研究[J].河北中医,2001,23(8):637.
       [2]李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海:上海科学技术出版社,1991:300,350,353.
       [3]徐淑兰,解砚英,王  凡,等.愈痔熏洗剂体外抗菌试验[J].山东医药工业,1998,17(6):40.
       (上海中医药大学中药药理毒理研究中心,上海  201203)
       作者简介:黄  坚(1978),男(汉族),上海人,现任上海中医药大学中药药理毒理研究中心检验员,硕士学位,主要从事药理学研究工作.
       
 

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