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大孔树脂吸附分离纯化玉屏风复方中色原酮苷的研究
作者:杨克迪,葛利,李宏,唐文,龙云飞    
作者单位:广西大学化学化工学院,广西 南宁 530004

《时珍国医国药》 2007年 第12期

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       【摘要】 
       目的大孔树脂吸附分离纯化玉屏风复方提取物中色原酮苷成分。方法采用静态吸附实验考察D101,AB8,S8,X5等7种大孔吸附树脂对升麻苷和5O甲基维斯阿米醇苷两种色原酮苷的吸附效果,筛选出吸附性能较好的树脂;对所筛选出的树脂,进一步采用固定床吸附法分离玉屏风提取物中色原酮苷,探讨主要参数对色原酮苷固定床穿透曲线及洗脱曲线的影响。结果AB8树脂的吸附性能优于其它考察的树脂,经AB8树脂固定床分离纯化后,玉屏风复方提取物中色原酮苷含量从0.55 %提高到10.01%,回收率为87.2%。结论AB8大孔吸附可用于玉屏风提取物中色原酮苷活性成分的分离纯化。
       【关键词】  玉屏风 色原酮苷 大孔树脂吸附 分离纯化
       Separation and Purification of Chromone Glycoside from Yupingfeng by Macroporous Resin Absorption
       YANG Kedi, GE Li, LI Hong, TANG Wen, LONG Yunfei
       School of Chemistry and Chemical Engineering, Guangxi University,Nanning  530004,China
       Abstract:ObjectiveTo separate and purify the chromone glycoside from the extract of Yupingfeng with macroporous resin absorption.MethodsThe resin suitable for separation of chromone glycoside was determined by static absorption experiment on seven different kinds of resins, and further more, the absorption and elution of chromone glycoside on the selected resin were studied by fixed bed absorption experiment. ResultsThe AB-8 resin was founded to be suitable for separation and purification of chromone glycoside. The experiment results showed that the content of chromone glycoside in the extract of Yupingfeng increased from 0.55% to 10.01% with a recovery rate of 87.2% by separation on fixed bed of AB-8 resin. ConclusionThe AB-8 resin is suitable for separation and enrichment of chromone glycoside in extract of Yupingfeng.
       Key words:Yupingfeng;  Chromone glycoside;  Macroporous resin absorption;  Separation and purification
       玉屏风复方是中医用于扶正的经典名方,由黄芪、白术、防风3味药材组成,升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷等色原酮苷是玉屏风主要活性成分之一[1]。目前,玉屏风制剂生产中,很少对玉屏风提取物中色原酮苷、皂苷等活性成分富集、纯化,制剂中活性成分含量较低。大孔树脂吸附分离技术可有效富集中药活性部位,是提高中药制剂水平的一种有效方法[2~4]。本实验探讨了玉屏风提取物中升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷两种色原酮苷的大孔树脂吸附分离,旨在为玉屏风制剂的生产和改进提供一定参考。
       1  仪器和试药
       Agilent 1100高效液相色谱仪 (美国Agilent公司); B-688恒流泵 (瑞士Buchi公司);LABOROTA 4000 旋转蒸发器(德国Heidolph公司);THZ-82恒温震荡器(江苏太仓华美生化仪器厂)。
       黄芪(批号20051101)、防风(批号20050301)、白术(批号20041129),购于广西一心药业公司,经鉴定符合2005年版《中国药典》(Ⅰ部)相关项下规定;升麻苷(批号 0781-20011)及5-O-甲基维斯阿米醇苷(批号 1523-200203)对照品(中国药品生物制品检定所);D101,AB-8,S-8,NKA-9,D3520,D4020,X-5大孔树脂购于南开大学化工厂;精制玉屏风复方提取物(色原酮苷含量为9.4%),自制。
       2  方法
       2.1  升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷HPLC分析色谱条件为Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),柱温30℃,以甲醇∶水=40∶60(V/V)为流动相,流速1 ml·min-1,检测波长254 nm。
       2.2  树脂静态吸附与解吸分别称取预处理好的D101,AB-8,S-8等湿树脂各0.5 g置于50 ml锥型瓶中,加入色原酮苷(升麻苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷)含量已知的玉屏风提取物溶液20 ml,在振荡器中以150 r·min-1的转速、30℃下振摇12 h。测定吸附平衡后溶液中色原酮苷的含量,计算树脂的平衡吸附量。
       
       称取色原酮苷吸附量已知的树脂置于50 ml的锥形瓶中,加入95%的乙醇溶液20 ml,在振荡器上以150 r·min-1的转速,30℃下振摇12 h,计算色原酮苷解吸率。
       2.3  固定床吸附分离筛选出的树脂湿法装于Φ1.0 cm×20 cm吸附柱中,树脂高度10 cm,取色原酮苷含量已知的料液以一定流速连续流过树脂柱,每20 ml分段接收流出液,分析流出液中色原酮苷的含量。固定床吸附结束后,以4倍床层体积去离子水洗柱,然后用洗脱剂连续洗脱。
       3  结果与讨论
       3.1  树脂筛选
       表1为不同型号树脂在实验考察条件下对色原酮苷的吸附和解吸效果。D101,AB-8及X-5等树脂对色原酮苷均有一定吸附能力;AB-8和X-5树脂的解吸效果较好。综合考虑树脂的吸附能力及解析效果,AB-8树脂较适宜于玉屏风提取物中色原酮苷的吸附分离。表1  不同型号树脂对色原酮苷的吸附效果(略)
       3.2  色原酮苷在AB-8树脂上的等温吸附行为
       图1为玉屏风提取液中色原酮苷在AB-8树脂上的等温吸附行为,降低温度有利于色原酮苷的吸附。对等温吸附数据进行拟合分析,溶液中色原酮苷浓度较低时,其吸附行为较符合Langmuir单分子层吸附模型,吸附速率较快,2 h内基本达到平衡(见图2);当提取物溶液中色原酮苷含量相对较高时,提取液中其它成分的含量也相对较高,由于竞争性吸附,杂质组分抑制了树脂对色原酮苷的吸附,图1中各温度下等温线略呈下降趋势。
        
       3.3  AB-8树脂固定床吸附分离色原酮苷
       图3为色原酮苷浓度为0.25 mg·ml-1的料液以不同流速流过AB-8树脂固定床时色原酮苷的穿透曲线,纵坐标为流出液中色原酮苷的对比浓度,横坐标为穿过树脂柱的料液体积。结果表明,低流速下,料液近似以活塞流穿过床层,固定床中传质区较窄,穿透曲线较陡直,树脂利用率较高;增加流速,料液与树脂接触时间变短,传质区扩展,穿透曲线趋于平缓,树脂利用率降低。图4为料液流速为1 ml·min-1,色原酮苷浓度对穿透曲线的影响。由图可知,随着料液中色原酮苷浓度增加,传质速率增加,传质区变窄,树脂利用率提高。综合考虑料液流速对树脂利用率及树脂床处理能力、料液中杂质与色原酮苷的竞争性吸附,本实验以料液流速为1 ml·min-1,色原酮苷浓度为0.25 mg·ml-1作为固定床吸附条件。
       图6进一步考察了30%乙醇作为洗脱剂,流速对色原酮苷洗脱过程影响。结果表明,流速较低时,峰形相对对称,但峰形较宽,有可能与料液中其它杂质峰重叠,影响分离效果;提高流速,洗脱峰集中,但峰拖尾程度有所增加。综合考虑,实验采用1 ml·min-1为洗脱流速。
       3.4  玉屏风复方提取物中色原酮苷吸附分离效果取色原酮苷含量为0.55%的玉屏风提取物用乙醇溶解,配成约0.25  mg·ml-1的色原酮苷料液,以1 ml·min-1的流速流过AB-8固定床,待色原酮苷穿透后,用4倍床层体积的去离子水洗柱,然后以100 ml 30%乙醇洗脱,收集洗脱液,挥去溶剂,分析得到的固形物中色原酮苷含量。实验结果表明,提取物中色原酮苷含量由0.55%提高到10.01%,色原酮苷回收率为87.2%。
       4  结论
       AB-8树脂对玉屏风提取物中色原酮苷有较好的吸附效果,其静态吸附量为4.18 mg·g-1,且便于洗脱,经AB-8固定床吸附分离后,提取物中色原酮苷从0.55%提高到10.01%,回收率为87.2%,色原酮苷得到有效富集。
       【参考文献】
           [1]国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005:409.
       
       [2]朱 浩,侯世祥,孙毅毅,等.大孔吸附树脂吸附纯化不同中药有效部位特性研究[J].中国中药杂志,1998,23(10):607.
       
       [3]刘 斌,石任兵.大孔吸附树脂吸附分离技术在中药复方纯化分离中的应用[J].世界科学技术-中医药现代化,2003,5(5):39.
       
       [4]王高森,侯世祥,朱 浩,等.大孔树脂吸附纯化中药复方特性研究[J].中国中药杂志,2006,31(15):1237.

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