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凉血散淤抗肿瘤研究进展
作者:张静, 吴正    
作者单位:南京中医药大学2006级博士研究生班,江苏 南京 210029

《时珍国医国药》 2008年 第4期

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       【摘要】 
       近年来的一些实验研究表明,凉血散淤方药如桃核承气汤、抵当汤及丹参、丹皮、赤芍、大黄等具有显著的抗肿瘤作用。其作用机制包括抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、诱导肿瘤细胞分化、抑制肿瘤细胞转移以及提高机体免疫力等。
       【关键词】  凉血散淤 抗肿瘤 综述
        “淤热”作为一种新的致病因素越来越受到中医界的重视。我们通过查阅大量的古今文献资料,结合多年的临床实践,提出淤热互结是恶性肿瘤的一个重要病机,凉血散淤是肿瘤治疗的又一项重要法则。大量的实验研究也表明具有凉血散淤作用的方药如桃核承气汤、抵当汤及中药丹参、丹皮、赤芍、大黄等具有显著的抗肿瘤作用。现就其抗肿瘤作用及作用机制总结如下。
       1  抑制肿瘤细胞增殖
       肿瘤细胞的一个重要特点是具有持续的增殖能力,抑制其增殖是抗肿瘤的一个重要靶点。多个实验证实凉血散淤方药能使肿瘤细胞的倍增时间延长,倍增倍数减少,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少。计春燕等[1]用不同浓度的丹皮提取物丹皮酚和5-FU,MMC,DDP处理人大肠癌细胞株HT-29。结果发现,丹皮酚在7.81~250 mg/L浓度范围内对HT-29细胞的增殖均有抑制作用,药物浓度越高,作用时间越长,其抑制作用越强。细胞形态观察显示丹皮酚组细胞增殖缓慢,随着药物浓度的增大及作用时间延长,细胞逐渐变小、折光率减弱,部分脱落漂浮于培养瓶中。而且低浓度的丹皮酚与上述化疗药物合用,可使化疗药物对细胞增殖的抑制作用增强。袁淑兰等[2]在体外用丹参酮处理多种肿瘤细胞——人早幼粒白血病(NB4)、维甲酸耐药的 NB4(MR2)、红白血病(K562)、肿瘤细胞系肝癌(SMMC-7721)、鼻咽癌(CNE-1)、肺腺癌(SPC-A-1)后,经丹参酮ⅡA 处理后的肿瘤细胞生长和增殖受到明显的抑制,且随丹参酮ⅡA 作用时间的延长,细胞生长抑制越明显。集落形成试验结果显示,经丹参酮ⅡA 处理过的肿瘤细胞集落形成明显被抑制,对 NB4和 MR2 的集落形成抑制率接近和达到 100%,而对鳞癌细胞的集落形成抑制率较低。通过流式细胞仪分析,经过丹参酮ⅡA处理后的细胞被阻止于G0/G1期,而S期细胞数明显减少,凋亡细胞明显增加,细胞增殖指数降低。李家宁等[3]用不同浓度的大黄素处理人肺腺癌细胞株Anip973,观察对其增殖的影响,结果显示在一定范围内,大黄素的剂量越大、作用时间越长,对肿瘤细胞生长的抑制作用越强。在大黄素作用下,DNA 合成前期Anip973细胞比例增加,DNA 合成期比例减少。本实验提示大黄素可明显抑制人肺腺癌Anip973细胞的增殖,其可能的机制之一是通过抑制细胞 DNA 合成,延迟细胞周期的进程,进而抑制了细胞的增殖。
       2  诱导肿瘤细胞凋亡
       细胞凋亡是机体生长发育、细胞分化和病理状态中细胞自主性死亡的过程,是机体保持自稳态的一种重要的方式。对于肿瘤组织而言,不同的凋亡指数,即凋亡细胞占细胞总数的百分比,在一定程度上与其对化疗的敏感性、肿瘤分化程度、分级、发展及肿瘤的生物学行为有关。诱导肿瘤细胞发生凋亡是目前进行肿瘤控制与治疗的可行方法之一,也是筛选抗癌药物的指标之一。刘剑波等[4]应用MTT、软琼脂克隆形成、DNAladder凝胶电泳及流式细胞术等方法,研究了中药单体大黄素对肝癌细胞HepG2生长增殖的影响以及作用机理。结果显示大黄素在较低浓度即可抑制肿瘤细胞的生长,在软琼脂实验中,大黄素可以浓度依赖的方式抑制细胞克隆的形成。经 DNA ladder及流式细胞仪检测发现,大黄素能诱导HepG2细胞凋亡,与阴性对照相比,随着药物浓度从10μg/ml增加到20μg/ml,AnnexinV染色细胞显著增多,由27.3% 增至 59.6%;当药物浓度增至 40μg/ml时,培养液中几乎无活细胞,由碘化丙啶和 AnnexinV双重标记的凋亡后期以继发性坏死细胞为主。提示中药单体大黄素在体外能抑制肝癌细胞HepG2的生长增殖,并能诱导该细胞凋亡。何金涛等[5]将体外培养的肺癌SPC-A-1细胞经无毒剂量的丹参酮ⅡA(0.5 mg/L)处理5 d,光镜、电镜观察细胞凋亡情况,流式细胞仪检测凋亡指数及凋亡相关基因的蛋白表达,并以全反式维甲酸及顺铂作为对照。结果显示SPC-A-1细胞经丹参酮ⅡA处理后,电镜观察可见多量凋亡细胞。流式细胞仪检测丹参酮组凋亡指数显著高于顺铂组,而与维甲酸组比较无显著差异。丹参酮组促凋亡基因p53,Fas,Bax表达水平明显升高,而凋亡抑制基因Bcl-2的表达水平则显著降低。提示丹参酮ⅡA具有诱导肺癌SPC-A-1细胞凋亡的作用,其分子机理可能是上调p53、Bax、Fas及下调Bcl-2的表达。 许惠玉等[6]用赤芍总苷作用于荷S180肉瘤小鼠,观测细胞调亡、Bcl-2蛋白及c-myc mRNA的表达。实验结果显示,赤芍总苷可以促进荷瘤小鼠体内肿瘤细胞发生凋亡,凋亡峰提前出现,峰值增高,且诱导细胞凋亡作用于细胞周期G1期和S期。实验组Bcl-2蛋白和c-myc mRNA表达水平降低,说明赤芍总苷诱导调亡的机制可能与下调Bcl-2和c-myc mRNA表达水平密切相关。
       3  诱导肿瘤细胞分化
       诱导分化治疗不杀伤肿瘤细胞,而是通过药物诱导肿瘤细胞向正常细胞转化,同时对正常细胞无杀伤作用,且少有骨髓抑制等副作用。故诱导分化是目前肿瘤治疗的新途径。梁勇等[7]研究了丹参酮ⅡA对初治、复发及耐药人急性早幼粒细胞白血病细胞体外诱导分化作用。将11例APL患者(初治5例、复发3例、对ARTA耐药3例)白血病细胞分别与0.5μg/ml(初治、复发病例)或1.0μg/ml(对ARTA耐药病例)丹参酮ⅡA一起原代培养。结果显示,丹参酮ⅡA处理了7 d的APL细胞,其形态及功能都趋向成熟和正常,表现为较高的诱导分化率及NBT还原能力。同时粒细胞表面抗原CD33表达下降,CD11b表达升高,统计学分析显示丹参酮ⅡA对初治、复发APL原代细胞诱导分化能力与ATRA相当。由此说明,丹参酮ⅡA不仅对初治、复发病例在体外具有与ATRA相当的诱导原代APL细胞向终末细胞分化的作用,而且对ATRA继发耐药的病例亦具有良好的诱导分化能力。
       4  抑制肿瘤细胞的转移
       转移是恶性肿瘤的一个重要标志,也是癌症病人死亡的重要原因,因此,抑制肿瘤细胞的转移也是抗肿瘤的一个重要方面。曹科等[8]采用小鼠结肠癌细胞脾移植肝转移模型,造模的同时开始给药,给药组给予活血化淤经典方抵当汤煎液灌胃,连续3周。并以模型组、空白组给予生理盐水灌胃作为对照,观察抵当汤对小鼠肝脏重量、肝转移灶数目、抑瘤率及对酪氨酸激酶受体信号转导系统EGFR的影响。结果显示,模型组小鼠肝脏重量增加,肝转移灶数目明显增多,酪氨酸激酶受体信号转导系统EGFR高度表达,抵当汤能够减轻实验小鼠肝脏重量,减少肝转移灶数目,使酪氨酸激酶受体信号转导系统EGFR低表达。提示抵当汤对小鼠肿瘤转移有一定的抑制作用。研究表明,肿瘤转移过程中,肿瘤细胞要与各种宿主细胞(内皮细胞、血小板和淋巴细胞等)或(和)细胞外基质、基底膜成分发生相互粘附,这一过程增加了肿瘤细胞生存、俘获和侵袭的能力,是转移发生的重要因素之一,因此抗粘附治疗是抗转移的一个新方向。孙婧等[9]研究了丹参对SMMC-7721肝癌细胞株(7721细胞)侵袭粘附能力和对裸鼠人肝癌切除术后转移复发的影响。结果显示丹参可抑制7721细胞的侵袭能力,促进已粘附细胞的脱落,可抑制7721与7721细胞、淋巴细胞、内皮细胞的粘附。早期切除丹参组肝内转移灶数目和转移灶累及的肝叶数均少于对照组。晚期切除丹参组肝内转移灶数目减少,与对照比较并无明显统计学差异,但转移累及肝叶数明显少于对照组。实验结果表明,丹参可通过抑制肿瘤细胞的侵袭粘附能力,降低裸鼠人肝癌切除术后的转移复发。
       5  提高机体免疫功能
       现代医学认为机体的免疫功能与肿瘤的发生和发展密切相关,当宿主免疫功能低下或受抑制时,肿瘤发病率升高,而在肿瘤进行性生长时,肿瘤患者的免疫功能也受到抑制。大量的研究表明活血化液的抗肿瘤作用与其调节机体免疫功能也有密切的关系。吴焱森等[10]以肉瘤S180肿瘤细胞株接种昆明小鼠制成荷瘤模型,观察中药抵当汤对荷瘤小鼠外周血白细胞数、免疫器官重量以及血清溶血素的影响,结果显示抵当汤能明显升高肉瘤S180小鼠的白细胞数,增加胸腺、脾的重量以及显著提高血清溶血素,表明抵当汤能通过提高机体的免疫力发挥抗肿瘤作用。许洪霞等[11]给荷S180肉瘤小鼠灌服桃核承气汤8d,发现桃核承气汤可使小鼠的瘤重减轻,T淋巴细胞增殖能力及NK细胞活性增强。与化疗药物环磷酰胺合用,可使环磷酰胺的抑瘤率增强并可拮抗环磷酰胺的抑制免疫作用。李坤珍等[12]的研究发现牡丹皮能刺激大量的B细胞活化、增殖,使脾脏基质细胞大量增生,使免疫器官重量增加,增强巨噬细胞分泌IL-1,IL-2和TNF等细胞因子的活性和NK细胞的细胞毒作用。于晓红等[13]的研究显示赤芍总苷能促进CD8分子的表达,恢复CD4+/CD8+平衡。华东等[14]的研究还显示赤芍总苷能提高IL-2,TNF-α的分泌,纠正荷瘤机体的Th1/Th2漂移现象,维持Th1的优势状态,同时对降低了的IL-4也有上调作用。
       综上所述,大量的体内外研究表明凉血散淤方药具有显著的抗肿瘤作用,其作用机制复杂,包括抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤细胞分化、抑制肿瘤细胞转移以及提高机体免疫力等多个方面。上述的研究成果反证了恶性肿瘤“淤热”病机的客观实在性,为临床上凉血散淤治则的提出及方药的应用提供了有力的依据。
       【参考文献】
           [1]计春燕,谭诗云,刘长青.丹皮酚抑制人大肠癌细胞增殖及其与化疗药物的协同作用[J].中国肿瘤临床,2005,32(9):513.
       
       [2]袁淑兰,宋 毅,王修杰,等.丹参酮ⅡA抑制多种肿瘤细胞生长的体外实验研究[J].华西药学杂志,2003,18(5):327.
       
       [3]李家宁,吕福祯,肖金玲,等 .大黄素抑制肺癌Anip973细胞增殖作用的量效关系[J].中国临床康复,2005,9(18):140.
       
       [4]刘剑波,高学岗,连 涛,等.大黄素在体外诱导人肝癌细胞发生调亡的初步研究[J].癌症,2003,22(12):1280.
       
       [5]何金涛,周清华,袁淑兰,等.丹参酮诱导人肺癌细胞凋亡及其分子机理[J].中国肺癌杂志,2002,5(4):257.
       
       [6]许惠玉,汪广荫,陈志伟.赤芍总甙对Bcl-2、c-myc基因表达影响及诱导细胞凋亡机制研究[J].中国免疫学杂志,2005,21:778.
       
       [7]梁 勇,井丽萍,王 珺,等.丹参酮对初治、复发及耐药人急性早幼粒细胞白血病细胞体外诱导分化作用[J].中华血液学杂志,2006,27(1):62.
       
       [8]曹 科,潘艳芳,陈佩禅,等.抵当汤对小鼠肿瘤转移及酪氨酸激酶受体信号传导系统EGFR的影响[J].中医药学刊,2004,22(11):2026.
       
       [9]孙 婧,周信达,刘银坤.丹参对肝癌转移复发防治作用的研究[J].中国中西医结合杂志,1999,19(5):292.
       
       [10]吴焱森,谢则平. 抵当汤对荷瘤小鼠免疫功能影响的实验研究[J].湖北省卫生职工医学院学报,2001,14(2);6.
       
       [11]许洪霞,王雅贤,许艳霞.桃核承气汤对荷瘤小鼠影响的实验研究[J].中医药信息,2006,23(1):52.
       
       [12]李坤珍,万京华,姚丽芳,等.牡丹皮对小鼠免疫功能的影响[J].数理医药学杂志,2002,15(1):76.
       
       [13]于晓红,于 洋,华 东,赤芍总苷对荷瘤小鼠抗肿瘤作用的免疫机理研究[J].江西中医学院学报,2005,17(1):61.
       
       [14]华 东,吴明媛,于晓红.赤芍总甙对荷瘤鼠细胞免疫功能的影响[J].中医药学报,2004,32(1):47.

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