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棕叶花提取物对动物离体子宫的兴奋作用
作者:唐祖年,梁成钦,覃文科,李丽    
作者单位:(桂林医学院,广西 桂林 541004)

《时珍国医国药》 2008年 第5期

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       【摘要】 
       目的探讨棕叶花不同提取物对家兔、豚鼠、大鼠、小鼠离体子宫的兴奋作用。方法采用BL-410生物机能实验系统,观察棕叶花4种提取物对非孕或注射己烯雌酚后家兔、豚鼠、大鼠、小鼠离体子宫的兴奋作用,并用EC50与益母草流浸膏进行比较。结果棕叶花正丁醇组分、水溶性组分均能使非孕或注射己烯雌酚后大鼠、小鼠、豚鼠、家兔离体子宫平滑肌的收缩频率增快、收缩幅度增强、张力明显提高,其兴奋子宫的强度比益母草流浸膏显著(P<0.05)。而石油醚组分、醋酸乙酯组分对上述动物兴奋子宫作用微弱。结论棕叶花正丁醇、水溶性组分对家兔、豚鼠、大鼠、小鼠离体子宫有明显兴奋作用。对离体子宫兴奋作用比益母草流浸膏显著。
       【关键词】  棕叶花; 离体子宫; 兴奋作用
       The  Effects  of  Extracts from Phrynium capitatum Willd Flower on Uterus of Animals in vitro
       TANG Zhunian, LIANG Chengqin, QIN Wenke, LI Li
       (Guilin Medical College,Guilin 541004,China)
       Abstract:ObjectiveTo study the effects of different extracts of Phrynium capitatum Willd flower on the uterus of rabbit, guinea pig, rat and mouse in vitro. MethodsIsolated uterus preparations of above animals were made according to the literature and  its contractive effects to four different extracts of Phrynium capitatum Willd flower were observed and recorded with BL-410 experimental system for biological function; the EC50s of the extracts were determined and compared with it of  Herba Leonuri fluid extract. Results It was found that the extracts with butyl alcohol and with water could increase both contraction frequency and force of smooth muscle of the uterus of non-pregnant or diethylstilbestrol-injected animals, which were much potent than that induced by Herba Leonuri fluid extract. (P<0.05). However, the effect of the extract with petroleum ether and with ethyl cyanocaetate was negligible. ConclusionThe extracts of Phrynium capitatum Willd flower with butyl alcohol and with water have excitatory effects on the non-pregnant or diethylstilbestrol-injected animal uterus in vitro ,which is more potent than that of Herba Leonuri fluid extract.
       Key words:Phrynium capitatum Willd flower;   Isolated uterus;   Excitatory effect
        棕叶花(别名冬叶花、柊叶花)Phrynium capitatum Willd (flower)为竹芋科(Marantaceae)多年生本草,分布广西、广东、云南等地。全草可入药。文献记载:“全草味甘淡,性微寒,有清热解毒、凉血、止血和利尿之功效。”广西少数民族民间有用其花治疗月经过多、血崩(功能性子宫出血)及失音等疾病之经验(《广西民族药简编》,1980广西药品检验所印行)。有文章报道棕叶花水提取物对孕或非孕小鼠、大鼠、豚鼠、家兔离体子宫及对家兔在体子宫都有兴奋作用[1],而关于其他溶剂提取物的药理研究尚未见报道。为了进一步研究其他溶剂提取物对子宫的兴奋作用,本文采用BL-410生物机能实验系统,观察棕叶花正丁醇、水溶性组分两种提取液对非孕或注射乙烯雌酚后家兔、豚鼠、大鼠、小鼠离体子宫的影响,并用EC50与益母草流浸膏进行比较。
       1  器材与方法
       1.1 受试药物与试剂棕叶花采自南宁地区,晒干备用。受试药物的制备:取干棕叶花750 g用中药材粉碎机粉碎后置10 000 ml圆底烧瓶中加95%乙醇浸没,加热冷凝回流1 h,抽滤,重复上述操作3次;药渣50%乙醇浸没,热冷凝回流1 h,抽滤,重复3次。合并滤液,用旋转蒸发仪浓缩。再加适量蒸馏水使浓缩物完全溶解,置6 000 ml的锥形瓶中,加石油醚1 000 ml振摇1 h,然后离心15 min(6 000 r/min),取上层液体,如此重复5次;剩下部分用醋酸乙酯、正丁醇、蒸馏水重复石油醚操作。所得的石油醚(为1号)、醋酸乙酯(为2号)、正丁醇(为3号)、水溶性组分(为6号)旋转蒸发仪浓缩,45℃烘干后置冰箱备用。益母草流浸膏经烤箱60℃烘干,固体经磨粹后放入磨口玻璃瓶备用。
       
       试剂:石油醚由广州化学制剂厂出品(批号20040501);乙酸乙酯购自广东精密化学品公司(批号20050203);正丁醇购自广东光华化学厂有限公司(批号20040717);益母草流浸膏为桂林漓江益佰制药厂产品(批号20050617)。
       1.2  仪器SYC-15超级恒温水浴(北京桑力电子设备厂);旋转蒸发器(郑州长城科工贸有限公司);BL-410生物机能实验系统(成都泰盟电子有限公司)。
       1.3 动物昆明种小鼠、Wistar大鼠、家兔、豚鼠均由桂林医学院动物室提供。
       1.4  动物离体子宫标本的制备取正常或经产未孕小鼠、大鼠、豚鼠和家兔,脱颈椎处死后剖腹取出子宫,立即置于盛有营养液(小鼠用Tyrode[2]氏液、大鼠用DeJaion氏液[3]、家兔用Krebs氏液[2]、豚鼠用Van Dyke-Hasting[2]氏液)的玻璃皿中,剥离子宫壁上附着脂肪组织,将一侧子宫角的两端分别用线结扎,按文献方法[4]一端固定于通气钩上,另一端连接在张力换能器(小鼠、大鼠和豚鼠用0~3 g,家兔用5 g张力换能器)上,置于含30ml营养液的麦氏浴槽,通入氧气,每秒通1~2个小气泡,麦氏浴槽恒温在(37±0.5)℃,张力换能器连于BL-410生物信号采集系统,调零、定标。增益调节G=50,时间常数T=DC,滤波调节F=30Hz,扫描速度S=16.00s/div[4]。稳定10 min后,进行实验。
       1.5  给药方法待标本稳定10 min后,加入正丁醇组分(0.1 g/ml)不同剂量,先测出兴奋子宫的最低有效量,然后按最低有效量依次增加剂量,直至子宫收缩达到最大效应,每次加药后观察和记录10min离体子宫收缩活动,更换营养液,冲洗3次,再加下一个浓度。小鼠最终浓度为0.16~3.3 mg/ml,大鼠最终浓0.33~3.3 mg/ml,家兔最终浓度为0.33~2.00 mg/ml,豚鼠最终浓度为0.03~0.40 mg/ml。水溶性组分、益母草流浸膏组分均按上述方法操作。
       2  结果
       2.1  对小鼠、大鼠离体子宫平滑肌的影响
       正常或经产未孕小鼠、大鼠各8只,3号与6号均能引起大鼠、小鼠离体子宫兴奋,使小鼠、大鼠离体子宫收缩频率、收缩振幅和收缩张力增加。大鼠子宫在剂量大于2.67 mg/ml时出现强直,小鼠子宫在剂量大于2.00 mg/ml时出现强直,并维持20 min以上,用营养液冲洗后子宫可复原。结果见图1~2。小鼠在最终浓度为0.16~3.3 mg/ml的浓度范围内呈量-效关系,大鼠子宫在最终浓度为0.33~3.3 mg/ml的浓度范围内呈量-效关系,在无自动节律收缩的子宫肌段,3号、6号均可使小鼠、大鼠离体子宫产生节律性地收缩。注射己烯雌酚后的小鼠(0.2 mg/kg)、大鼠(0.5 mg/kg)上述作用更为明显。结果见图3~4。
        益母草流浸膏浓缩物无论对孕或非孕大鼠、小鼠离体子宫作用不明显。
       2.2 对妊娠家兔离体子宫平滑肌的影响妊娠家兔4只,共实验4次,结果一致, 3号与6号均能引起家兔子宫的兴奋,使子宫肌的收缩频率、收缩振幅和收缩张力增加。在最终浓度为0.33~2.00 mg/ml的浓度范围内呈量-效关系。结果见图5~6。
       2.3 对正常豚鼠离体子宫平滑肌的影响未孕成年豚鼠8只,小剂量最终浓度为0.03 mg/ml,就能引起豚鼠离体子宫的兴奋,使无自主收缩的子宫出现收缩。随着剂量的增加,离体子宫的收缩频率和幅度加快和增强。在剂量大于最终浓度为0.33 mg/ml时出现强直,这表明豚鼠对3号和6号更为敏感。结果见图7~8。
       2.4 计算EC50以每次加入药物后兴奋子宫平滑肌的最大效应为100%,求出药物兴奋子宫的量效关系,以振幅的百分数为y轴,以最终浓度为x轴,代入回归方程y=ax+b,经计算机(Windows98, Microsoft Excel数据分析工具)求出a和b,再求出平均50%的效应即EC50。结果见表1。表1   正丁醇组分和水溶性组分及益母草流浸膏对不同动物离体子宫的EC50(略)
       3  讨论
        实验结果表明,棕叶花正丁醇组分、水溶性组分均能使非孕或注射己烯雌酚后大鼠、小鼠、豚鼠、家兔离体子宫平滑肌的收缩频率增快、收缩幅度增强、张力明显提高,提示这两种提取物均含有兴奋子宫平滑肌的活性物质。通过水溶性组分、正丁醇组分对小鼠、大鼠离体子宫EC50的比较,前者兴奋子宫作用比后者稍强(见表1),提示活性物质在水溶液中含量比在正丁醇稍多。通过注射己烯雌酚后的比较(见表1),其结果表明雌激素对两种组分的子宫平滑肌兴奋有增强作用;与益母草流浸膏EC50的比较,其兴奋子宫作用明显强于益母草(P<0.05),其中对豚鼠子宫的兴奋作用最强(P<0.01)。而石油醚、醋酸乙酯组分对离体子宫兴奋作用微弱。
        
        棕叶花除了对子宫有兴奋作用外,其植物其他部分是否有兴奋子宫作用尚需进一步研究,对正丁醇和水溶性组分中的活性物质有待进一步分离提纯和鉴定。
       【参考文献】
           [1]韦玉先,柊叶花对大鼠、小鼠、豚鼠、家兔子宫的作用[J].桂林医学院学报,1990,3(1):2.
       
       [2]徐叔云,卞如濂,陈 修,等.药理实验方法学,第3版[M].北京:人民卫生出版社,2002:1584.
       
       [3] Ian Kitehen Textbook of in vitro Practical Pharmacology[M]. Blackwell Scijentfic publiications.London.1980:33.
       
       [4]刘善庭,王 清,李健美,等.3种棕榈花蕾提取液对大鼠离体子宫平滑肌作用的比较研究[J].中国中医药科技,2003,10(4):228.

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