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消痛贴膏中润湿剂的透皮促透作用研究
作者:王红梅 张彤 赵婷婷 屈华    
作者单位:上海中医药大学,上海 201203

《时珍国医国药》 2009年 第3期

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       【摘要】 
       目的评价消痛贴膏中润湿剂的透皮促透作用。方法选择消痛贴膏中主药独一味所含木犀草素为模型药物,采用离体扩散池法,以高效液相色谱测定接受液中木犀草素的含量。含量测定采用Platisil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm,迪马公司);乙腈∶0.1%磷酸(35∶65)为流动相;检测波长为350 nm;流速1.0 ml·min-1。结果木犀草素进样量在0.040 88~2.044 μg范围内与峰面积线性关系良好,r=0.999 8。与对照组渗透系数0.373 2相比,加润湿剂组渗透系数3.97,渗透系数增加10.63倍。结论该润湿剂能增加消痛贴膏中木犀草素的渗透速率和累积透过量。
       【关键词】  消痛贴 润湿剂 促透 木犀草素
       中药等传统医药中的外用制剂中的有效成分一部分在体表起消除皮肤炎症、杀菌等作用外,另一部分可以透过皮肤角质层进入皮下及肌肉组织局部,吸收进入体循环,产生全身或局部治疗。传统的中药透皮给药制剂有散剂、软膏剂、硬膏剂等。近年来,随着制药技术的进步和药用高分子药用材料的应用,诸如涂膜剂、巴布剂、凝胶剂等新剂型也多有应用。为了促进处方中有效成分的透皮吸收,通常会在制剂中加入一定的透皮吸收促进剂。透皮吸收促进剂的加入量、加入方式以及和基质的相容性成分为中药透皮给药制剂的处方设计和制备工艺的难点。经过检索,在我国批准上市中药品种中,消痛贴膏(国药准字:Z54020113)中促透剂的加入方法很有特点:将促透剂(润湿剂)与主药分开,使用时将药贴的塑料薄膜揭除,将小袋内的润湿剂均匀涂在中间药垫表面,敷于患处或穴位。本研究采用扩散池评价消痛贴膏中润湿剂的促透作用。
       1  仪器与材料
       
       HP8453E紫外可见光谱仪(Aglient公司); Aglient 1100型高效液相色谱仪(Aglient公司);Platisil C18(5 μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱;RYJ-6A型药物透皮扩散实验仪(上海黄海药检仪器有限公司)。消痛贴膏(奇正藏药有限公司,批号070632)。木犀草素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:111520-200504)。木犀草素单体(南京青泽医药科技开发有限公司,批号QZM07110, HPLC检测含量大于90%)。甲醇为色谱纯(Merck公司);其他试剂均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司);双蒸水,自制。昆明种小鼠,雄性,体重18~22 g(普通级,许可证号SCXK 2003-0003,上海斯莱克动物有限公司,饲养于上海中医药大学实验动物房二楼)。
       2   方法与结果
       2.1   木犀草素体外透皮实验分析方法的建立
       2.1.1   HPLC测定色谱条件及系统适用性实验检测波长的选择: 参照《中国药典》[1]独一味含量测定项下方法,吸收波长选择为350 nm。
       
       色谱条件:色谱柱,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Platisil C18, 5 μm,4.6 mm×250 mm);流动相,乙腈∶0.1%磷酸(35∶65);检测波长350 nm;流速1.0 ml·min-1;柱温30℃。理论塔板数按木犀草素计算应不低于3 000,两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。结果见图1~2。
       图1  木犀草素对照品HPLC图(略)
       图2  样品HPLC图(略)
       2.1.2  木犀草素HPLC测定方法学考察供试品溶液的制备:将消痛贴膏药粉用10倍20%的乙醇提取3次,60 min/次,收集提取液,回收乙醇至干,得提取物。取消痛贴膏药粉提取物35 mg,加入10 mg木犀草素单体,实验组溶于2 ml的奇正润湿剂,稀释组溶于2 ml润湿剂稀释液(润湿剂∶水=1∶1)中,对照组溶于2 ml 的蒸馏水中,超声30 min。
       
       接受液比例:聚乙二醇400∶生理盐水 = 20∶ 80
       
       木犀草素线性关系考察[2,3]:精密称取木犀草素对照品10.22 mg置100 ml棕色容量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,制成每毫升含木犀草素102.2 μg的对照品储备液;精密吸取该液0.2,0.5,1,2,4,5,10 ml置10 ml棕色容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成每毫升含木犀草素2.044,5.11,10.22,20.44,40.88,51.1,102.2 μg的系列对照品溶液,分别精密吸取上述系列对照品溶液各20 μl,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,记录色谱图,测定结果见表1,并以对照品浓度X(μg/ml)为横坐标,峰面积值Y值(mAU)为纵坐标,绘制标准曲线。回归方程:Y=86.275X,r=0.999 8。结果表明,木犀草素在0.040 88 ~2.044 μg范围内线性关系良好。
       表1  木犀草素线性关系考察(略)
       精密度实验[4]:①日内精密度    配置低、中、高3个浓度的木犀草素对照品溶液,1 d内注入液相色谱仪测定3次,测定木犀草素峰面积积分值,求出相对标准偏差。结果见表2。②日间精密度:以上低、中、高3个浓度的木犀草素对照品溶液,测定1次/d,共测定5次。结果见表3。
       表2  木犀草素日内精密度(略)
       表3  木犀草素日间精密度(略)
       稳定性实验:精密吸取浓度为5.11 μg/ml的对照品溶液20 μl,按上述色谱条件,分别于0,1,2,4,6,8,12,24 h进样,峰面积平均值为 438.9,RSD=1.15%。
       
       回收率实验:精密吸取浓度为0.2 mg/ml的木犀草素对照品溶液5,1,0.5 ml,分别置于10 ml容量瓶中,用空白的透皮接受液(比例为PEG400∶NS=1∶5)定容至刻度,配制成高中低3个不同浓度的溶液。取20 μl进样,测得峰面积,进行方法回收率实验。结果见表4。
       表4  木犀草素回收率实验(略)
       2.2   润湿剂的透皮促透作用研究
       2.2.1   皮肤的选择和处理取雄性小鼠,断颈处死,即刻用电动剃毛刀剔出腹部鼠毛,取下皮肤,将取下的皮肤平铺于干净的玻璃板上,角质层朝下,用镊子剔除皮下的脂肪组织及黏连物后,用生理盐水反复冲洗干净,密封冷冻于-10℃冰箱中保存,于1周内使用,每次实验前目视检查鼠皮的完整性,如有破损则不得使用。
       2.2.2   实验分组加润湿剂组、加润湿剂1∶1稀释组、对照组(不加润湿剂)。
       2.2.3   实验方法向体外透皮吸收仪中加入适量水,开启电源和恒温槽磁力搅拌,设定温度为(37±0.5)℃,将新鲜离体去毛小鼠的皮肤固定于改良Franz扩散池进行体外透皮吸收实验,真皮面向接受液。将供给药物放入供给池中,向接受池内注入5 ml接受液,放入透皮吸收仪中,设定接受池搅拌速度为400 r/min。15 min后开始计时,记为0 min,分别于1,2,3,4,6,8 h取样,每次取样的同时需向接受池中补充等量的接受液,样品通过0.45 μm 微孔过滤膜,测定。结果见表5。
       表5  透皮吸收实验结果(略)
       3  小结
       
   
       透皮吸收促进剂的加入方式以及与基质的相容性是中药透皮给药制剂的处方设计和制备工艺的难点。将促透剂(润湿剂)与主药分开,使用时润湿剂加入的给药方式回避了透皮给药制剂处方设计和制备工艺的难点,同时,类似于利福平滴眼液,这种给药方式也避免了一些天然活性成分在溶液中稳定性差的不足。
       
       本研究是为了评价润湿剂的促透作用,但由于消痛贴膏中的可测成分木犀草素含量较低(仅为0.084 %),研究中在消痛贴主药提取物中加入木犀草素单体作为模型药物,这样增加了透皮吸收的成分检测的可行性;同时,较单独用化学单体为模型药物,更好模拟了制剂中其他成分存在的情况下的透皮吸收行为。
       
       研究表明消痛贴膏的润湿剂中含有樟脑、冰片等成分,正是由于这些成分的存在,使润湿剂具有了皮肤促进作用。实验结果表明与对照组渗透系数0.373 2相比,加润湿剂组渗透系数3.968 1,渗透系数增加10.63倍,说明润湿剂能增加消痛贴膏中木犀草素的渗透速率和累积透过量。同时实验中将润湿剂稀释1倍,结果稀释组比对照组渗透系数增加4.18倍,说明润湿剂的促透作用与樟脑、冰片等起促透作用的成分有一定的量-效关系。
       
       研究中还以消痛贴膏主药等剂量制备成凝胶剂,同法测定,结果在接受液中很难检测到木犀草素。实验中还考察过氮酮及润湿剂在凝胶剂中的促透作用,仅加氮酮组6 h后能检测到目标峰,但峰面积很小,在标准曲线的检测下限附近。说明木犀草素可能被凝胶剂中的大分子基质包裹,不宜释放。提示外用透皮吸收制剂在进行剂型改革时,需要进行皮肤渗透实验的比较研究。对于需要透皮吸收的成分,凝胶剂可能不完全适用。
       【参考文献】
           [1] 国家药典委员会. 中国药典,Ⅰ部[S]. 北京: 人民卫生出版社, 2005: 184.
       
       [2] 刘兰生, 宋 阳, 扬 锡,等. 高效液相色谱法测定奇正消痛贴膏中木犀草素的含量[J].中国药事, 2006, 20 (7): 418.
       
       [3] 徐春波, 温 艳, 闫美霞. 独一味分散片中木犀草素和总黄酮的含量测定[J]. 中成药, 2006, 28 (9): 1389.
       
       [4] 汪凤梅, 姚彤炜, 曾 苏. HPLC测定四方蒿中总木犀草素苷的含量[J]. 中国药学杂志, 2005, 40 (8): 618.

经典中医古籍

中药学教材(附图片)

穴位数据库(附图片)