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反相高效液相色谱法测定三越麻黄颗粒中甘草酸的含量
作者:滕亮,李桂荣,孙殿甲,木巴拉克    
作者单位:新疆医科大学药学院,新疆 乌鲁木齐 830054;新疆医科大学第一附属医院,新疆 乌鲁木齐 830054

《时珍国医国药》 2009年 第5期

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       【摘要】 
       目的建立三越麻黄颗粒中甘草酸的反相高效液相色谱(RPHPLC)含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法测定三越麻黄颗粒中甘草酸含量,Kromasil ODS1 C18色谱柱(5 μm,4.6 mm×250 mm),流动相为乙腈0.05M磷酸二氢钾(用三乙胺调pH5.75)(26.5∶73.5),检测波长为250,柱温为40 ℃,流速为1.0 ml/min。结果三越麻黄颗粒颗粒中甘草酸的线性范围为3.75~154.5 μg/ml (r=0.999 8),加样回收率100.2%,RSD=2.5%。结论采用RP-HPLC法测定甘草酸具有简便、准确、重复性好的优点,可为三越麻黄颗粒的质量控制提供一定的依据。
       【关键词】  高效液相色谱法 甘草酸 三越麻黄颗粒
       三越麻黄颗粒由10味药材(麻黄、石膏、苦杏仁、板蓝根、甘草、陈皮、柴胡、射干、鱼腥草、浙贝母)精制而成。方中甘草为使药。甘草酸是甘草药材中的主要指标成分之一,拟定该成分的含量测定标准可以反映和控制本品的内在质量。本文参照有关文献[1~4],建立了HPLC 法测定本品中甘草酸的含量,以期达到能够准确定量的目的。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器Waters2690高效液相色谱仪,Waters2487紫外检测器,Kromasil ODS1 C18色谱柱(5 μm,4.6 mm×250 mm)及保护柱,电子分析天平(BS110S,北京赛多利斯有限公司)。
        
       1.2   试药乙腈为色谱纯(一级),水为重蒸水,其它试剂均为分析纯
       1.3  对照品甘草酸单铵盐(Aldrich Chem Co.,批号23,2246),使用前置于干燥器中干燥至恒重。
       2  方法
       2.1  色谱条件 流动相为乙腈0.05M磷酸二氢钾(用三乙胺调pH 5.75)(26.5∶73.5);检测波长250 nm  ;  柱温40 ℃  ; 流速1.0 ml/min。
       2.2  溶液的配制
       2.2.1  对照品溶液的制备取甘草酸单 铵盐对照品约20 mg,精密称定,置100 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取适量,用甲醇稀释成每毫升含3.75,7.49,11.59,14.68,18.62,22.40,26.27,30.13,38.63,74.93,154.40 μg甘草酸单铵盐对照品溶液。
        
       2.2.2  供试品溶液的制备取本品适量,研细,精密称取约1.000 0 g,至50 ml量瓶中,加甲醇约30 ml,超声30 min,放冷至室温,定容至刻度,吸取约2 ml过0.45 μm滤膜,即得供试品溶液。
       3  结果
       3.1  系统适用性实验取“2.2.1”项下标准品溶液、“2.2.2”项下供试品溶液,照“2.1”项下的色谱条件分别注入高效液相色谱仪,记录色谱图。结果见图1。在上述条件下,橙皮苷和供试品中其它组分色谱峰可达基线分离,甘草酸与其相邻色谱峰的分离度大于1.5, 以甘草酸峰计算柱效, 其理论板数(N)为6 000 以上,拖尾因子T为1.04,同时取阴性对照溶液进样。结果表明,阴性对照在甘草酸色谱峰位置处无相应峰出现。故在系统适用性试验中规定理论板数不得低于6 000。供试品和阴性对照的 HPLC 色谱见图2~3。
       3.2  线性范围的考察精密量取甘草酸单铵盐对照品系列溶液10 μl进样,记录色谱图,测定其峰面积。结果见表1。并以峰面积值(A)对浓度(C)进行回归,得标准曲线方程:A=5 834.7C-8 388.1,r=0.999 8。以上结果表明,在3.75~154.5 μg/ml范围内,甘草酸峰面积值(A)与浓度(C)有良好的线性关系。
       图1  甘草酸对照品色谱(略)
       图2  阴性对照色谱图(略)
       图3  供试品色谱(略)
       表1  线性范围的考察(略)
       3.3  精密度实验 精密吸取上述对照品溶液,重复进样5次,甘草酸峰面积值的RSD为0.28%。结果见表2。
       表2  精密度实验结果(略)
       3.4  稳定性实验取供试品试液(批号20020729)分别于0,2,4,6,8,10 h,进样测定。结果见表3。实验结果表明,供试品液在10 h内稳定性良好。
       表3  稳定性实验结果(略)
       3.5  重复性实验 按拟定的含量测定方法,对同一批供试品(20020915),分别制备6份供试品溶液,测得峰面积并计算甘草酸含量。结果见表4。
       3.6  回收率实验取已知含量的供试品9份(批号20020825),分别加入0.772 5 mg/ml的甘草酸对照品溶液0.46,0.58,0.7 ml,按上述供试品制备方法和色谱条件,制备加样回收供试品溶液并注入液相色谱仪,计算回收率。结果见表5。
       3.7  供试品测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液适量,按上述色谱条件测定。结果见表6。
       表4  重复性实验结果(略)
       表5  回收率实验结果(略)
       表6  供试品测定结果(略)
       4  讨论
       
   
       预实验采用《中国药典》中甘草项下的HPLC条件进行测定,结果无法实现复方制剂中甘草酸的有效分离,在采用文献[2]的条件进行预试时发现有可能实现预期的色谱峰分离,因此以该流动相系统为基础进行进一步的比例优化,结果表明在提高流动相酸性的同时引入一定量的三乙胺不仅可以提高分离效果,也可以起到保护色谱柱的效果,最终确定流动相组成为2%甲醇乙腈-0.1%磷酸和0.1%三乙胺(25∶75),并以该色谱条件为基础进行了方法学考察。
       
       本实验建立了测定三越麻黄颗粒中甘草酸含量的高效液相色谱方法。经方法学考察,该方法符合《中国药典》中有关质量标准建立的要求[5],具有快速灵敏、准确可靠、简便易行、重复性好等优点,可用于控制三越麻黄颗粒的质量。
       【参考文献】
           [1] 杨江丰,陈 理,孙靖霞.RPHPLC测定强肝胶囊中芍药苷及甘草酸的含量[J]. 中成药,2001,23(2):90.
       
       [2] 杜海燕,何跃华,徐晓阳,等.HpLC法测定牛黄清心丸中甘草酸含量[J]. 中草药,1999,30(7):507.
       
       [3] 程晓霞,向 瑛.甘草及其制剂中甘草酸的定量方法研究概况[J]. 时珍国医国药,2000,11(4):380.
       
       [4] 谷会岩,郭兴顺,杨逢建.国内甘草酸测定方法研究进展[J]. 东北林业大学学报,2002,30(4):79.
       
       [5] 国家药典委员会. 中国药典,Ⅰ部[S]. 北京:化学工业出版社,2005:附录ⅥD,附录33.

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