转换到繁體中文
您的位置 : 首页 > 报刊

抗眩晕方药两种方法提取液的成分比较
作者:乔晓莉,李婉晴,王洪志,樊 华,刘 勇     
作者单位:(天津市南开医院,天津 300100)

《时珍国医国药》 2010年 第11期

  多个检索词,请用空格间隔。
《二十五史》在线阅读及全文检索    《四库全书·史部》在线阅读及全文检索   
       【摘要】 
       目的对抗眩晕方药半仿生提取法(简称SBE法)和水提取法(简称WE法)两种方法的提取液进行比较。方法以泽泻醇B乙酸酯、川芎嗪、阿魏酸以及大黄素与大黄酚之和、总生物碱、干浸膏含量为指标,利用高效液相色谱法、紫外分光光度法测定其含量。结果SBE液各指标成分含量均高于WE液,二者反相液相色谱图,SBE液多数共有峰的峰面积积分值均高于WE液。结论抗眩晕方药两种提取液中,以SBE法明显优于WE法。
       【关键词】  抗眩晕; 半仿生提取法; 水提取法
       抗眩晕方药为我院治疗梅尼埃氏病的特色制剂,根据半仿生提取理论,在优选其最优提取条件的基础上,以泽泻醇B乙酸酯、川芎嗪、阿魏酸等为指标,对半仿生提取法与水提取法两种提取液进行了成分比较研究。
       1 仪器与药品
       LC-10A型高效液相色谱仪,岛津SPD-10A紫外检测器, AUTO SCIENCE AT-330 柱温箱,AGT C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);岛津UV-160A紫外分光光度仪;RE-52型旋转蒸发仪(天津第一玻璃厂);KQ3200型超声波清洗器(昆山市超声波仪器厂);PHS-3C型酸度计(浙江箫山科学仪器厂);试剂均为色谱纯,水为娃哈哈饮用纯净水。泽泻醇B乙酸酯、川芎嗪、阿魏酸、大黄酚、大黄素、盐酸水苏碱对照品(中国药品生物制品检定所)。泽泻、白术、川芎、益母草、钩藤、决明子药材均购自天津市中药饮片厂。
       2 方法与结果
       2.1 供试液的制备
       2.1.1 水提取液按处方比例称取泽泻12.30 g,白术6.16 g,川芎10.26 g,益母草10.26 g,决明子6.16 g,置圆底烧瓶内,按常规水提取法用1 000 W电热套加热回流提取3次(加水量分别为10,8,6倍,煎煮时间分别为2.0,1.5,1.5h),提取液用4层纱布过滤,60℃减压蒸至1∶1,以水定容至110 ml,得WE液。
       2.1.2 半仿生提取液按照“2.1.1”项下方法,用10%HCl调第一煎pH值为2.0,用10%NaOH分别调第二煎、第三煎pH值为7.5,8.5,依法制得SBE液。
       2.2 泽泻醇B乙酸酯的含量测定[1,2]
       2.2.1 色谱条件色谱柱为AGT C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈水(85∶15);检测波长:208 nm;流速1.0 ml·min-1;柱温25℃;进样量20 μl。
       2.2.2 对照品溶液的制备精密称取泽泻醇B乙酸酯对照品0.70 mg,用甲醇溶解并稀释至10 ml,即得70 μg·ml-1的对照品溶液。
       2.2.3 供试品溶液的制备精密吸取“2.1”项下的提取液各5.4 ml于25 ml容量瓶中,加15 ml甲醇超声30 min,以甲醇定容至25 ml,过滤,微孔滤膜滤过,即得供试品溶液。
       2.2.4 样品含量测定 将供试品溶液按“2.2.1”项下色谱条件进行测定,记录峰面积,以外标法计算样品含量。结果见表1。
       2.3 川芎嗪和阿魏酸的含量测定[3,4]
       2.3.1 色谱条件色谱柱为AGT C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为甲醇乙腈1%冰乙酸(1∶1∶5);检测波长280 nm;流速0.8ml·min-1;柱温25℃;进样量20 μl。
       2.3.2 对照品溶液的制备 分别精密称取川芎嗪对照品0.60 mg、阿魏酸对照品5.10 mg,用甲醇溶解并稀释至10 ml,即得对照品溶液的混合溶液(每毫升含川芎嗪60 μg,含阿魏酸510 μg)。表1 两种方法提取液中泽泻醇B乙酸酯含量
       2.3.3 供试品溶液的制备精密吸取“2.1”项下的提取液各5.4 ml,加25%乙醇80 ml超声30 min,取40 ml于分液漏斗中,用二氯甲烷萃取3次,每次40 ml,收集二氯甲烷液,以0.1 mol·L-1盐酸甲醇液调pH1.2,挥干,用甲醇定容至10 ml,微孔滤膜滤过,即得供试品溶液。
       2.3.4 样品含量测定将供试品溶液按“2.3.1”项下色谱条件进行测定,记录峰面积,以外标法计算样品含量。结果见表2~3。表2 两种方法提取液中川芎嗪含量表3 两种方法提取液中阿魏酸含量
       2.4 大黄素、大黄酚之和含量测定[5,6]
       2.4.1 色谱条件色谱柱:AGT C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸(85∶15);检测波长:254 nm;流速:1.0 ml·min-1;柱温:25℃;进样量20 μl。
       2.4.2 对照品溶液的配制分别精密称取大黄素对照品0.12 mg,大黄酚对照品0.26 mg,用甲醇溶解并稀释至10 ml,即得对照品溶液的混合溶液(每毫升含大黄素12 μg,含大黄酚26 μg)。
       2.4.3 供试品溶液的制备精密吸取“2.1”项下的提取液各25 ml于分液漏斗中,用氯仿萃取4次,每次30 ml,收集氯仿液,减压浓缩至干,残渣加无水乙醇醋酸乙酯(2∶1)溶解并定容至10 ml,微孔滤膜滤过,即得供试品溶液。
       2.4.4 样品含量测定将供试品溶液按“2.4.1”项下色谱条件进行测定,记录峰面积,以外标法计算样品含量。结果见表4。
       2.5 总生物碱的含量测定[7,8]
       2.5.1 对照品溶液的制备精密称取盐酸水苏碱对照品适量,用0.1 mol·L-1盐酸溶液溶解并稀释,得到盐酸水苏碱浓度为0.216 mg·ml-1的对照品溶液。表4 两种方法提取液中大黄素和大黄酚含量之和
       2.5.2 供试品溶液的制备精密吸取“2.1”项下的提取液各30 ml旋转蒸发至干,加0.1 mol·L-1盐酸溶液10 ml使溶解,离心,抽滤,分2次(共10 ml)洗涤离心的残渣,再离心并抽滤,合并两次滤液用0.1 mol·L-1盐酸溶液定容至25 ml,精密吸取10 ml于烧杯中,加活性炭0.5 g于沸水浴中加热0.5 min,边加热边搅拌,滤至25 ml容量瓶中,加2%新配制的雷氏盐2 ml ,再用0.1 mol·L-1盐酸溶液定容至25 ml,在冰水浴中放置1 h,过滤,取续滤液进行测定。取对照品溶液10 ml,同上提取作为对照品溶液;以0.1 mol·L-1盐酸溶液10 ml同上提取作空白溶液。
       2.5.3 样品含量测定将上述样品溶液、对照品溶液、空白溶液利用紫外分光光度法在525 nm波长处进行测定,总生物碱含量以盐酸水苏碱计算。结果见表5。表5 两种方法提取液中总生物碱含量
       2.6 干浸膏的含量测定[9]按照《中国药典》Ⅰ部附录X.A浸出物测定法,取“2.1”项下的提取液各5.4 ml,置已干燥至恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,于105℃烘干3 h,移至干燥器中,冷却30 min,即刻精密称重,计算干浸膏的含量。结果见表6。表6 两种方法提取液中干浸膏含量
       2.7 WE液与SBE液的多成分反相液相色谱精密吸取“2.1”项下的提取液各5 ml,加醋酸乙酯萃取3次,每次20 ml,合并醋酸乙酯液,挥干,残渣加甲醇定容至10 ml,微孔滤膜滤过后进样20 μl,进行色谱分析。采用AGT C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为A:甲醇,B:0.1%甲酸水溶液;梯度洗脱条件:B:80%~35%(0~110 min),35%(110~130 min);检测波长为280 nm;流速0.8 ml·min-1;柱温25℃;进样量20 μl。两种提取液色谱图见图1,各吸收峰面积积分值见表7。  表7 两种方法提取液色谱图中吸收峰面积积分值图1 两种提取液色谱图
       3 讨论
       以泽泻醇B乙酸酯、川芎嗪和阿魏酸及大黄素大黄酚之和、总生物碱、干浸膏含量为指标,对抗眩晕方药两种提取液成分进行比较,结果,SBE法明显优于WE法。抗眩晕方药SBE法与WE法多成分反相液相色谱图表明,SBE液检出15个吸收峰,而WE液只检出9个吸收峰,SBE液色谱图中除7号峰面积积分值低于WE液外,其它峰面积积分值均高于WE液。
       本文及多种制剂研究报道提示[10,11],SBE法具有许多的优越性,在中药方药的提取过程中,有着广阔的应用前景。
       【参考文献】
          [1] 段 启,龚千峰,王少军,等.中药饮片泽泻的炮制工艺和质量标准研究[J].陕西中医学院学报,2004,27(3):51.
       
       [2] 文红梅,彭国平,池玉梅,等.泽泻药材的质量标准研究Ⅰ-泽泻中2种泽泻醇的HPLC测定法[J].中国临床药理学杂志,1998,18(6):375.
       
       [3] 兰 顺.高效液相色谱法测定复方川芎胶囊中川芎嗪的含量[J].中国实验方剂学杂志,2004,10(5):1.
       
       [4] 桂 卉,肖锦仁,邹 龙.HPLC考察川芎茶调颗粒制备中川芎嗪的动态变化[J].中成药,2003,25(4):279.
       
       [5] 冯映冰,龚志萍.决明子中大黄酚含量的反相HPLC法测定[J].分析测试学报,1999,18(4):79.
       
       [6] 余建清,雷嘉川,马俊玲,等.不同炮制方法对决明子中蒽醌类成分的影响[J].中医药学报,2000,28(6):35.
       
       [7] 晁 志,王厄舟,周秀佳.益母草药材中生物碱含量与产地生态环境的关系[J].第一军医大学学报,2000,20(6):504.
       
       [8] 张清民,朱颖虹,熊 艳.益母草不同制剂盐酸水苏碱含量的测定[J].中成药,2001,23(6):437.
       
       [9] 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005:附录X.A.
       
       [10] 张兆旺,孙秀梅,王 蕾,等.麻杏石甘汤2种提取方法的成分比较[J].中国中药杂志,1997,22(7):413.
       
       [11] 张学兰,张兆旺,孙秀梅,等.四神茶剂4种提取方法的药效学比较[J].中国中药杂志,1997,增刊:201.

经典中医古籍

中药学教材(附图片)

穴位数据库(附图片)